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OCTET相互作用系统理论与实验设计培训
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OCTET相互作用系统理论与实验 设计培训

This presentation is the Confidential work product of Pall Corporation and no portion of this presentation may be copied, published, performed, or redistributed without the express written authority of a Pall corporate officer ? 2014 Pall Corporation

培训人 :陈涛 应 用 经理

Agenda

? 生物膜干涉技术原理与动力学基础
? OCTET相互作用仪的大体应用 ? 生物分子的固化与传感器的选择

? 结合解离的注意点和数据分析
? 再生条件的摸索 ? 定量分析

2

Octet平台组成

3

ForteBio传感器的基本构造

Fiber optic rod

Reference layer

固化方式与固化(检测)物质的不同,创造出了不同传感器。

4

生物膜干涉技术(Bio-Layer Interferometry ,BLI) ? 当一束可见光从光谱仪射出后,在传感器末端的光学膜层的两个界面 会形成两束反射光谱,并形成一束干涉光谱。

? 任何由于分子结合而形成的膜层厚度变化,能够通过干涉光谱的位移 值而体现。

5

Biolayer Interferometry (BLI)
Application of white light interferometry in monitoring molecular interactions

White light

Constructive interference 100% Partially constructive interference
0 Relative Intensity

Internal Reference (reflection surface 1)

Interface with Liquid (reflection surface 2) Destructive Wavelength interference

6

Interferometric Pattern Changes with Increased Molecular Thickness

100% Relative Intensity 0

Wavelength
7

干涉光谱位移-时间曲线图可以提供动力学参数

100% Relative Intensity 0

Distance between the two reflecting surfaces = ?
nm shift

Wavelength (nm)

Intensity λ =

?( )
λ, ?
8

Function of density and optical thickness

Time

Octet仪器中内部主要结构

9

Octet平台动力学检测自动化流程

Baseline Baseline Loading

Octet Biosensors

Buffer Ligand-Biotin(ligand) Protein of Interest (analyte)
? ? ? ?

Binding (nm)

Association

Dissociation

Time 一次检测8个通道 所有数据是实时的 反应的时间,位置,转速,温度,步骤可以自行设定 Baseline, Association和Dissociation三步对于计算动力学参 数KD值是必须得。
10

动力学参数的计算
1:1 binding模型: A(ligand) + B(analyte) ka kd AB
ka = 结合常数,Kon kd = 解离常数,Koff

KD =

kd ka

R=R0+Req(1-e-kobs*t)

R=R0+Rte-kd*t

Kobs=Ka*[B]+Kd,表观结合常数
Req为一定analyte浓度下的平衡信号,相当于无限长结合时间的最终信号。 Rt为解离起始的信号。

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简明操作
仪器

传感器

样品

Warm for 30min

Hydrate(prewet) for at least 10min

Prepare sample plate and warm it to RT.

程序设定(acquisition software)

测试

数据分析(analysis software)

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有奖问答

– 下面哪些说法是对的?
A 生物膜干涉技术的光源是可见光 B 动力学检测可以获得Kon,Koff,KD;亲和力检测只

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